Cefixima 32

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Determinación de la cefixima mediante un método HPLC validado indicador de la estabilidad y la identificación de sus sustancias afines por LC-MS / MS Estudios Resumen cefixima es un importante antibiótico de cefalosporina que fácilmente se descompone y libera diferentes sustancias afines en los pasos de preparación y almacenamiento. El objetivo de este estudio fue desarrollar un método simple, preciso y exacto isocrática cromatografía líquida (LC) para la determinación de cefixima en presencia de sus sustancias relacionadas generados a partir de la tensión térmica en el fármaco a granel. Las condiciones cromatográficas fueron formados por una columna C18 de fase inversa (4.6 1. La recuperación del método optimizado fue entre 94.6 y 98.4 y las desviaciones estándar relativas inter e intra-día fueron menos de 3,3. Los resultados obtenidos muestran en la LC - UV método propuesto puede ser utilizado convenientemente en un laboratorio de control de calidad para el análisis de rutina de cefixima de las sustancias de ensayo y afines, así como para la evaluación de las muestras de estabilidad de medicamentos a granel. Palabras clave: cefixima sustancias relacionadas, LC-MS / MS , medicamentos a granel, impurezas Introducción cefixima, (R 6, R 7) -7- (Z )-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-(carboxymethoxy)iminoacetyl-amino)-3-ethenyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo4.2.0oct-2-ene-2-carboxylic ácido, es un antibiótico de cefalosporina de tercera generación absorbe por vía oral, que fue aprobado por la Administración de Alimentos y Fármacos de Estados Unidos en 1997 para el tratamiento de leve a moderada infecciones bacterianas. Tiene un amplio espectro antibacteriano contra varias bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, incluyendo Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae, Escherichia coli, y Klebsiella pneumoniae resistente a la ampicilina, cefalexina, cefaclor, y trimetoprim-sulfametoxazol. se utiliza para el tratamiento de infecciones susceptibles, incluyendo la gonorrea, la otitis media, faringitis, infecciones del tracto respiratorio inferior, tales como bronquitis y las infecciones del tracto urinario-2. 1. La presencia de impurezas en las drogas debe ser identificado y cuantificado para evaluar la eficiencia y la estabilidad de los productos de drogas como factores esenciales de su calidad y seguridad. 3 5 un producto farmacéutico, cuando no de una suficiente estabilidad, puede resultar en cambios en las características físicas (como la dureza, velocidad de disolución, separación de fases, etc.), así como las características químicas (formación de sustancias de descomposición de alto riesgo) 6. 7. Cefixima degrada en condiciones de almacenamiento (temperatura y humedad relativa) y sus productos de degradación pueden causar efectos secundarios indeseables en los pacientes 8. 9. Se requiere que un método analítico ser validados para demostrar que las impurezas únicas a la cefixima no interfieren con, o que se separa de la cefixima, sus productos de degradación de los productos de la droga. Cefixima se ha estudiado y determinado por relativamente pocos procedimientos tales como espectrofotométrico en forma de dosificación 10. 11, fluorimétrico en la materia prima y formas de dosificación 12, voltamétrica en formas de dosificación y fluidos biológicos 13. 14, de cromatografía de líquidos de alto rendimiento en formas de dosificación y biológica fluidos 15, 19, y de alto rendimiento de cromatografía en capa fina en forma de dosificación 20 métodos. Sin embargo, estos métodos no son específicos para la determinación de cefixima en presencia de sus impurezas y / o productos de degradación. El objetivo de este estudio fue desarrollar y validar un método cromatográfico para la determinación de cefixima en presencia de sus sustancias relacionadas para la evaluación de la pureza del fármaco a granel y la estabilidad térmica de formas de dosificación. Un método isocrático de cromatografía líquida (LC) se realizó con una columna de C18 a temperatura ambiente con una solución acuosa de detección UV de agua y acetonitrilo utilizando. Además, algunas sustancias relacionadas con cefixima-se han identificado utilizando el pico de muestras estándar de impurezas conocidas cefixima y una espectrometría de masas en tandem con cromatografía líquida método (LC-MS / MS). El método LC-UV propuesto se ha validado en base a los criterios de linealidad, recuperación, repetibilidad, y los límites de detección (LD) y cuantificación (LOQ). Resultados y Discusión método LC-UV Algunas impurezas se han introducido para cefixima en BP propuesto. La estructura y el peso molecular de cefixima y su A1. La presencia del tampón de fosfato causó este método tonot sea compatible con el sistema MS, haciendo que la identificación de las otras sustancias relacionadas con cefixima-imposibles. También, cefexime es un compuesto muy sensible, que se descompone fácilmente en condiciones ambientales. Es beneficioso si un sistema MS cualitativa y cuantitativamente puede medir la cefixima y sus compuestos relacionados con alta sensibilidad y precisión. El objetivo de este trabajo sugiere un método LC-UV que es compatible con un detector de MS para análisis de cefexime y compuestos relacionados en línea. Las estructuras químicas de cefixima y sus impurezas propuestos en BP Con el fin de optimizar las condiciones cromatográficas para la separación de cefixima de sus sustancias relacionadas por el método LC-UV propuesto, se utilizó la solución de la tensión térmica cefixima que contenía algunas sustancias relacionadas. La condición analítica fue seleccionado después de probar los diferentes parámetros tales como prótico y disolventes orgánicos apróticos, composición de la fase móvil, y la tasa de flujo para separar la cefixima y sus sustancias relacionadas. Los resultados mostraron que un incremento en el contenido de agua en presencia de acetonitrilo, como un disolvente aprótico, condujo al aumento en la resolución, pero cuando el contenido de agua fue 1. La presencia de ácido fórmico en la fase móvil dio lugar a repetible y Gaussian picos a temperatura ambiente. Bajo esta condición óptima, el tiempo de retención de cefixima era 11,13 min y algunos picos adicionales apareció en el cromatograma de la solución de la tensión térmica cefixima. Identificación de las sustancias relacionadas con la cefixima-después del estrés térmico Con el fin de identificar las sustancias relacionadas con la cefixima-, se realizaron dos métodos. En el primer método, las muestras estándar disponibles de algunas impurezas conocidas (AE) sobre la base de la Pharamcopeoia Británica (BP), se enriquecieron por separado de la solución de la tensión térmica cefixima. Los cromatogramas obtenidos, antes y después del enriquecimiento cada estándar impureza, se compararon. Dado que la fase móvil del método de LC propuesta era compatible con el sistema MS, LC-MS / MS fue utilizado como el segundo método para la confirmación de la estructura de sustancias relacionadas con cefixima-en la solución de la tensión térmica. La exploración de masa total y espectros MS / MS de los dos picos principales se muestran en la Fig. 2. Para la intensidad pico más alto, se muestra el m / z a 454 perteneciente a MH de cefixima. La fragmentación MS / MS del ión molecular protonado cefixima-produjo 285, 241, 210, y 182 m / z, que caracteriza las estructuras químicas relacionadas en la Fig. 2a. Para el pico con un tiempo de retención relativo 1,2 a la cefixima, el espectro de masas completo indicó un ión molecular protonado a m / z 428 que puede estar relacionado a la impureza B. Además, el m / z en 214 en el espectro completo podría estar relacionado con la estructura química tal como se muestra en la Fig. 2b y el m / z en 410 y 384 en la fragmentación MS / MS podría estar relacionado con una pérdida de H 2 O y grupos CO del ion molecular protonado, respectivamente. Además, se encontró que el pico molecular protonado de iones de impureza A (472 m / z) para el pico a un tiempo de retención relativo de 0,8 a la cefixima. El análisis completo y MS / MS de fragmentación de los iones moleculares protonados para a) la cefixima y b) la impureza B en la solución de la tensión térmica. Los espectros de masas de los picos a tiempos de retención relativos de 1,3 y 1,7 a la cefixima, mostró iones moleculares similares a la cefixima. Al estar enriquecida con las normas indican que estos picos pertenecen a las impurezas C y D, respectivamente. Sobre la base de los resultados obtenidos para la identificación de sustancias relacionadas con cefixima-usando ambos métodos, se identificaron cinco picos como se muestra en la Fig. 3. Los porcentajes de cefixima y sus sustancias relacionadas conocidas en el fármaco a granel de las soluciones de estrés frescas y térmicos se resumen en la Fig. 4. Como se puede ver, las impurezas D y B no están presentes en la muestra fresca, sin embargo, se detectaron como los principales productos de degradación en la cefixima, cuando la temperatura se incrementó. Las impurezas A, C, y E tenía diferentes intensidades y estaban presentes tanto en las muestras de estrés frescas y térmicas de cefixima. Por otra parte, 2.8 del fresco y 5.6 de las soluciones de estrés térmico de cefixima en el fármaco a granel pertenecían a compuestos desconocidos. cromatograma caracterizado de la solución de la tensión térmica cefixima en 300 E se muestran en la Fig. 1. cefixima y porcentajes sustancia relacionada conocidos basados ​​en área de pico relativa aparecieron en los cromatogramas de soluciones de estrés frescas y térmicas del fármaco a granel. La validación del método La idoneidad del sistema fue evaluada por diez análisis repetidos de la cefixima a la concentración de 100 1. respectivamente, indicando que el método se puede utilizar para la detección y cuantificación de cefixima en un intervalo de concentración muy amplio. La precisión intra - e inter-día se calcula a partir de las muestras de control de calidad para la cefixima en tres niveles de concentración utilizando dos fases móviles optimizados como se describe en la sección experimental. La precisión intra-día se evaluó mediante la realización de tres determinaciones (N3) a la misma concentración, durante el mismo día, en las mismas condiciones experimentales, y la precisión inter-día se evaluó mediante la comparación de los ensayos en tres días diferentes. Los resultados obtenidos para el intra - e inter-día exactitud y precisión de la cefixima mediante el método LC-UV propuesta se resumen en la Tabla 1. Los resultados indicaron buenas recuperaciones para el ensayo propuesto (94.698.4) con la desviación estándar relativa inferior 3.3. se utilizó Exactitud y precisión del método LC-UV propuesto para la determinación de cefixima en presencia de sus sustancias relacionadas análisis de los productos farmacéuticos El método validado se ha descrito anteriormente para determinar el contenido total de fármaco de dos marcas disponibles en el mercado de tabletas de cefixima que contienen 200 y 400 mg de cefixima. Las recuperaciones de cefixima a partir de 200 y 400 mg comprimidos fueron 97,1 (RSD: 0,4) y 94,5 (RSD: 1,1), respectivamente. Los resultados del ensayo indican que el método es selectivo para el análisis de cefixima sin interferencia de sus sustancias relacionadas y los excipientes de tabletas. materiales Experimental químicos estándar de trihidrato de cefixima y sus impurezas AE se obtuvieron de Hanmi (Seúl, Corea). El metanol y acetonitrilo de calidad HPLC se adquirieron de Caledon (Ontario, Canadá). El agua utilizada para la preparación de la fase móvil y las soluciones se obtuvo a través del sistema de purificación de agua Milli-Q. Otros productos químicos utilizados en calidad de reactivo analítico se adquirieron de Merck (Darmstadt, Alemania). Instrumentos de un sistema de HPLC que contiene una bomba de Kontron Modelo 420, inyector de válvula Rheodyne (Rohnert Park, CA, EE. UU.) equipado con una 20 1. La composición de la fase móvil para el método LC-UV variado en el proceso de optimización de 80:20 a 90:10 v / v de agua: acetonitrilo incluyendo 0,5 ácido fórmico. A ThermoFisher Scientific (Bremen, Alemania) espectrómetro de masas de trampa de iones (LCQ modelo, rango de masas m / z 1040 eV La fase móvil se compone de agua:.. Acetonitrilo (85:15 v / v) incluyendo ácido fórmico 0,5 Preparación de soluciones estándar Una solución fresca del trihidrato de cefixima pura a 300 C durante 1 h. Este procedimiento se repitió para el fármaco a granel de cefixima. Preparación de las soluciones de productos farmacéuticos diez tabletas de dos formas de dosificación de cefixima (que contiene 200 y 400 mg cefixima) fueron precisión se pesaron y finamente pulverizado por mortero y mano de mortero. una cantidad adecuada de este polvo, correspondiente a una solución a un nivel de concentración de 350 L se inyectaron en el HPLC para verificar la demanda de la etiqueta perteneciente a la cefixima. Cada análisis se repitió tres veces. el medicamento contenido en una tableta se determinó mediante referencia a las ecuaciones de regresión. la validación del método una curva de calibración se preparó usando el método LC-UV propuesto con ocho calibradores más de un intervalo de concentración de 0,11 para la cefixima y construido por el trazado de las áreas de pico frente a las concentraciones respectivas. La linealidad se evaluó por el método de regresión por mínimos cuadrados, que fue utilizado para calcular el valor r, ordenada en el origen, y la pendiente de la recta de regresión. Los límites de detección (LOD) y de cuantificación (LOQ) se calcularon por el método basado en la desviación estándar (/ S. La exactitud y la precisión del método se determinaron para la sustancia fármaco mediante el análisis del control de calidad estándar) muestras (QC en tres concentraciones de cefixima (50, 350, y 650 1) usando el método LC-UV propuesto. la exactitud se estableció mediante la evaluación de la cantidad determinada a partir de las muestras de control de calidad y la comparación de que al valor nominal respectiva expresan como porcentaje de recuperación. la precisión del método se estableció mediante la inyección de tres muestras replicadas estándar de control de calidad en cada nivel de concentración para la precisión intra-día y en tres días por la precisión entre días. la precisión se expresa mediante la desviación estándar relativa (RSD), de las recuperaciones. Agradecimientos los autores agradecen . el Consejo de Investigación de la Universidad de Alzahra de apoyo financiero Referencias 1 Brogden RN, Richards DM cefixima:. 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